İçerik
Biyokimya, DNA, RNA ve proteinler gibi molekülleri inceler. Leke teknikleri, bilim adamlarının bu tür molekülleri ayırmak için kullandıkları şeydir. Hücrelerde bir karışım halinde bulunurlar. Leke yapmak araştırmacıların samanlıktaki bir iğne gibi birçoğundan bir protein bulmasını sağlar. Kurutma genellikle bir DNA, RNA veya protein karışımının bir jel tabakasından akmasına izin verilerek yapılır. Bu jel küçük moleküllerin büyüklerinden daha hızlı hareket etmesine izin verir. Ayrılan moleküller daha sonra bir moleküle karşı bastırılır ve bu, molekülleri jelden zar üzerine hareket ettirmeye yardımcı olur. Moleküller membrana yapışır, ancak hala jeldeymiş gibi birbirlerinden ayrı olarak aynı yerde kalırlar.
Batı leke
Western blot, proteinleri boyuta göre fakat düz kolonlarda ayırmak için kullanılan yaygın bir tekniktir. Bu paralel sütunlar araştırmacıların bowling şeritleri gibi yan yana koşan farklı numunelerdeki protein miktarlarını karşılaştırmalarını sağlar. Örneğin, farklı miktarlarda bir ilacın hücre büyümesi üzerindeki etkisini test ediyorsanız, dört farklı hücre grubuna farklı miktarda ilaç tedavisi uygularsınız. Sonra hücreleri açabilir ve her grubun proteinlerini bir jel üzerinde ayrı şeritler halinde çalıştırabilirsiniz. Proteinleri bu şekilde yaymak, artan bir ilaç konsantrasyonunun belirli bir proteine ne yaptığını görmenizi sağlar.
Kuzey leke
Northern blot, RNA'yı tespit etmek için kullanılır. Hücreler, RNA'larını serbest bırakmak için açılabilir. Farklı hücre tiplerinden gelen RNA, bir jel üzerinde ayrı şeritler üzerinde çalıştırılabilir. Jel, farklı RNA'yı boyuta göre yayar. Bu temiz, paralel RNA sıraları, bir araştırmacının hangi hücre tipinin ne kadarının hangi RNA türüne sahip olduğunu karşılaştırmasını sağlar. Bu yöntem, bir araştırmacının belirli bir hastalığa ait hücrelerin bu RNA'dan daha fazla mı yoksa bu RNA'dan daha az mı olduğunu belirleyebilmesini sağlar. Northern blot, bir hastalığın RNA üretimi düzeyinde nasıl çalıştığını ortaya çıkarabilir.
Güney lekesi
Southern blot, adlandırma sistemini başlatan orijinal blot tekniğidir. Edwin Southern tarafından icat edildi. Southern blot, bir karışımdaki DNA miktarını tespit etmek için kullanılır. Tıpkı protein ve RNA'da olduğu gibi, bir hücrenin DNA'sı açıldığında serbest bırakılabilir. Southern blot, DNA'yı farklı hücre tiplerinden boyutlarına göre ayırır. Her numuneden gelen DNA temiz, paralel şeritlere yayılır. Tek tek DNA parçaları, yalnızca bu DNA parçasına bağlanmak üzere tasarlanmış bir radyoaktif veya flüoresan probu kullanılarak tespit edilebilir. Radyoaktif bir probdan gelen enerji sinyali veya bir floresan sinyalinden gelen ışık parlamaları araştırmacılara her bir örnekte bu DNA parçasının ne kadarının olduğunu söyler.
Diğer lekeleri
Üç ana lekeleme tekniği - Batı, Kuzey ve Güney - biraz farklı molekülleri tespit etmek için farklı şekillerde değiştirildi. Western blot, örneğin Southern blot'a karşı. sırasıyla protein ve DNA'yı algılar. Her modifiye edilmiş teknik genel olarak olağan şekilde yapılır, ancak paralel şeritlere yayılan molekülü tespit etmek için farklı bir yöntem kullanır. Güneybatı benekleri, DNA'ya yapışmış protein moleküllerini tespit eder. Kuzeybatı benekleri RNA'ya yapışmış protein moleküllerini tespit eder. Uzak batı lekeleri, diğer proteinlere yapışmış protein moleküllerini tespit eder.