HPLC Çözünürlükleri Nasıl Hesaplanır?

Posted on
Yazar: Monica Porter
Yaratılış Tarihi: 20 Mart 2021
Güncelleme Tarihi: 19 Kasım 2024
Anonim
HPLC Çözünürlükleri Nasıl Hesaplanır? - Bilim
HPLC Çözünürlükleri Nasıl Hesaplanır? - Bilim

Kimyacılar, bileşik karışımlarını ayırmak için yüksek performanslı sıvı kromatografisi veya HPLC kullanırlar. Genel olarak, yöntem bir numunenin bir veya daha fazla çözücü ile karıştırıldığı bir sütuna enjekte edilmesinden oluşur. Farklı bileşikler, farklı derecelerde kolona adsorbe eder veya "yapışır"; ve çözücü, bileşikleri kolon boyunca iterken, karışımın bileşenlerinden biri önce kolondan çıkacaktır. Cihaz, kolondan çıkarken bileşikleri tespit eder ve x ekseni üzerinde tutma süresi ve y eksenindeki detektörden gelen sinyal yoğunluğundan oluşan bir komplodan oluşan bir kromatogram üretir. Bileşikler kolondan çıktığında, kromatogramda "tepe noktaları" oluştururlar. Genel olarak, ne kadar uzak olursa ve kromatogramdaki tepe noktaları ne kadar dar olursa çözünürlük de o kadar yüksek olur. Bilim adamları yeterli bir ayrımı temsil etmek için 1.0 veya daha yüksek bir çözünürlüğü düşünmektedir.

    X ekseni değerlerinin her tepe noktasının tabanında bulunduğuna dikkat ederek, kromatogramdaki iki bitişik tepenin genişliğini ölçün. X ekseni, genellikle saniye cinsinden ölçülen tutma süresini gösterir. Bu nedenle, bir tepe 15.1 saniyede başlar ve 18,5 saniyede sona ererse, genişliği (18.5 - 15.1) = 3.4 saniyedir.

    Tutma zamanlarını, zamanı, yani x-ekseni üzerindeki, tepe noktalarının maksimumlarının konumlarına karşılık gelen konumu belirleyerek belirleyin. Bu değer normal olarak 1. adımdaki genişliği hesaplamak için kullanılan iki değerin yaklaşık yarısı kadar olacaktır. Örneğin 1. adımda verilen örnek, yaklaşık 16.8 saniyede maksimum bir değer sergileyecektir.

    İki tepe noktası arasındaki çözünürlüğü (R) hesaplayın.

    R = (RT1 - RT2) /,

    buradaki RT1 ve RT2, 1 ve 2 tepe noktalarının tutulma sürelerini temsil eder ve W1 ve W2, bazlarından alınan tepe noktalarının genişliklerini temsil eder. Örnek 2 ve 3'ten devam ettirildiğinde, bir tepe 16.8 saniyelik bir tutma süresi ve 3.4 saniyelik bir genişlik sergiler. İkinci tepe, 3.6 saniyelik genişlikle 21.4 saniyelik bir tutma süresi sergilerse, çözünürlük,

    R = (21,4 - 16,8) / = 4,6 / 3,5 = 1,3.