İçerik
Bir enzim tarafından katalizlenen kimyasal reaksiyonlarda, enzim, sübstratla geçici olarak bağlanarak ve gerilmiş bir duruma çevirerek gereken aktivasyon enerjisini azaltır. Reaksiyon için k (katalizör) veya "kcat", belirli bir enzimin bir substratı bir ürün molekülüne metabolize edebileceği oran için konsantrasyondan bağımsız sabiti ifade eder. Kcat'ı hesaplamak için, bilim adamları ilk önce farklı test konsantrasyonlarında ("enzimatik test" olarak da bilinir) çeşitli test tüplerini karıştırır ve ürün moleküllerinin artan konsantrasyonlarını ölçmek için ışık spektrofotometresi ile sabit zaman aralıklarında test ederler. Bu veriler daha sonra bir grafiğe çizilir ve analiz edilir.
İlk Hızların Hesaplanması
Enzimatik deneyler ilk test tüpünden elde edilen veriler için zamana karşı ürün konsantrasyon grafiğini çizin. Not: Yatay eksen "zaman" ve dikey eksen "ürün konsantrasyonu" olmalıdır.
Kısım 1, Adım 1'de çizdiğiniz veri noktaları için doğrusal regresyon çizgisini hesaplayın. Excel ve grafik hesap makineleri bu doğrusal modeli kolayca belirleyebilirken, ürün konsantrasyonundaki farkı bitişik veriler arasında bölerek regresyon çizgileri eğiminin bir tahminini elde edebilirsiniz. zamandaki farklılıklarını gösterir.
Doğrusal regresyon çizgisinin eğimini Bölüm 1, Adım 2'deki "başlangıç reaksiyon hızı (Vo)" olarak kaydedin. Not: regresyon çizgi modelinde "= m + b," "m" katsayısı eğimdir.
Testteki test tüplerinin geri kalanı için Adım 1, 2 ve 3'ü tekrarlayın.
Vmax hesaplanıyor
Her test tüpü için substrat konsantrasyonunun tersini başlangıç reaksiyon hızının tersine karşı çizin (Bölüm 1, Adım 4'ten). Örneğin, ilk substrat konsantrasyonu 50 mikromolar (uM) olan bir test tüpünün başlangıç hızı 80 uM / s ise, tersi substrat konsantrasyonu için 1/50 uM ve başlangıç için 1/80 uM / s olacaktır. hız. Not: Ters substrat konsantrasyonu yatay eksende olmalı ve ters başlangıç hızı dikey eksende olmalıdır.
Not: substrat konsantrasyonu yatay eksende olmalı ve ilk reaksiyon hızı dikey eksende olmalıdır.
Bölüm 2, Adım 1'de çizdiğiniz grafik için doğrusal regresyon çizgisini belirleyin. Not: regresyon çizgisi için y-kesişimi bilmeniz gerekeceğinden, Bölüm 2, Adım 1'deki noktaları Excel veya A'ya girmelisiniz. grafik hesap makinesi ve yerleşik regresyon modelleme işlevini kullanın.
Doğrusal regresyon çizgisinden y-kesiştiği yere 1 bölün. Bu, Vmax'ın tersinin değerini, enzim için maksimum reaksiyon hızını verecektir. Not: Doğrusal regresyon modeli "= m + b" biçimini alırsa, "b" değeri y-kesişimi olacaktır. Vmax'ın tersini hesaplamak için 1'i "b" ye bölün.
Gerçek Vmax değerini hesaplamak için Bölüm 2, Adım 3'teki sonuçlara bölün.
Orijinal tahlilde enzim konsantrasyonunu belirleyin (ham verilere bakınız). Not: enzim konsantrasyonu tüm test tüpleri için aynıdır; sadece substrat konsantrasyonları tahlilde değişiklik gösterir.
Vmax'ı (Bölüm 2, Adım 4'ten) enzim konsantrasyonuna (Bölüm 2, Adım 5'ten) bölün. Sonuç Kcat'ın değeridir.