İçerik
- Seyreltme Örnekleri, Kaplama ve Kuluçka
- Manuel sayma
- Otomatik Sayma
- Saymayı Daha Karmaşık Hale Getirmek
Bir numunedeki mikrop konsantrasyonunu belirlemenin klasik yollarından biri, numuneyi seyreltmek, mikropları plakalar üzerinde büyütmek ve kolonileri saymaktır. Kaplama mikroplar, bir veya daha fazla hücreden oluşan bir koloni oluşturan birimden görülebilen ve sayılabilen görünür bir koloni halinde büyür. Bakteriler, plaka sayımlarını kullanarak değerlendirmek için en yaygın mikroptur. Koloni sayımı toprak, su ve gıdadaki mikropları tespit etmek ve saymak için kullanılır. Kolonileri sayma protokolleri doğru ve metodik bir yaklaşımı vurgular.
Seyreltme Örnekleri, Kaplama ve Kuluçka
Bir agar plakasında mikrop numunesini basitçe bulaştırırsanız, ayrı ayrı kolonilerin bir araya geleceği ve saymalarını imkansız hale getirecek kadar çok koloni oluşturan birim göreceksiniz. Bu sorunu çözmek için numuneyi sıvı bir ortama karıştırın, bu karışımın küçük bir miktarını alın ve daha fazla seyreltin. Bu işlemi altı ila 10 kez tekrarlayın. Son seyreltmeyi bir agar plaka üzerine yayın ve kolonileri saymadan önce dört ila yedi gün boyunca inkübe edin.
Manuel sayma
Kolonileri saymadaki temel numara, her koloni noktasını bir kez saymaktır. Bir yaklaşım, Petri kabının bir ızgara zemin üzerine yerleştirilmesi ve her bir hücre hücresindeki kolonileri saymak, tüm hücrelerde metodik bir düzende hareket etmektir. Petri kabının arkasındaki işaretlenmiş kolonileri işaretlemek de yararlı bir yaklaşım olabilir. Genellikle, en az üç plaka saymanız gerekir; Mikrobiyoloji Ağı’nın, laboratuvarlara ve üreticilere danışmanlık hizmeti veren bir firma olduğunu söyleyerek, yalnızca sağlam çıkarımlar yapmak için yalnızca 30 ila 300 koloni içeren plakaları kullanın. Kolonileri saymak için çok fazla olan veya çok az koloni bulunan plakların yeni bir dilüsyondan tekrar kaplanması gerekir.
Otomatik Sayma
İnsan hatası, kolonileri manuel olarak saymaya dahil olan süreye eklenir. Hem doğruluğu hem de verimliliği artırmak için, Petri kabını otomatik bir koloni sayma cihazına yerleştirin. Otomatik koloni sayaçları yemeğin görüntüsünü alır, kolonileri arka plandan ayırır ve sonra plakadaki kolonileri saymak için bir algoritma kullanır. Algoritmalar, iki veya daha fazla koloni kenarlarına temas ettiğinde kolonileri ayırt etmekte zorluk çekebilir, bu nedenle devam eden yazılım geliştirme alanıdır.
Saymayı Daha Karmaşık Hale Getirmek
Koloni sayımlarından mikrop yoğunluğunu hesaplama doğruluğunun bazı sınırlamaları vardır. Koloni oluşturan birimler, tek bir hücre, bir hücre zinciri veya bütün bir hücre kümesi olabilir. Varsayım, bir koloni bir hücreyi temsil ettiği için koloni sayımlarından hesaplanan konsantrasyonlar düşük olabilir. Farklı mikroplar, farklı büyüme koşullarına ihtiyaç duyarlar ve plakadaki koloniler, sadece bu inkübasyon koşulları altında bu büyüme ortamı üzerinde gelişen mikropları temsil eder. Ek olarak, koloni sayımı, orijinal örnekteki hücre konsantrasyonuna ihtiyaç duyduğunuzda önemli bir husus olan ölü hücreleri kaydetmez.