İçerik
Bilim adamları, bakteri kültürlerinin popülasyon yoğunluğunu hesaplamak için seri dilüsyonları (1:10 dilüsyon serisi) kullanırlar. Az sayıda bakteri içeren bir kültür damlası kaplanıp inkübe edildiğinde, her bir hücre teorik olarak diğer hücrelerden kendi kolonisini oluşturacak kadar uzakta olacaktır. (Gerçekte, bazı koloniler yakındaki iki hücrenin torunları olabilir, ancak bu, seyreltik kültürlerde nadirdir ve bu nedenle kolonilerin sayısı, orijinal olarak plakaya aktarılan hücre sayısının çok iyi bir tahminidir. Bilinmeyen, uygun sayıda koloniye sahip bir plaka ile sona erdirmek için çeşitli dilüsyonlar kullanılmalıdır.
Seri Dilüsyonlar
Altı test tüpünü (her biri 9 mL büyüme ortamı içeren) 1 ila 6 olarak etiketleyin. Altı agar plakasını 1 ila 6 olarak etiketleyin. 1 mL bakteri kültürünü tüpe aktarmak için pipetleyici ve steril 1 mililitre (mL) pipet uçları kullanın 1.
İyice karıştırın ve bir pipet ve steril 1 mL uçlar kullanarak tüp 1'den tüp 2'ye 1 mL aktarın.
En son kullanılan tüpten bir sonraki tüpe 1 mL aktarırken kalan tüpler için Adım 2'yi tekrarlayın.
Bir pipetleyici ve steril 0.1 mL uçları kullanarak tüp 1'den agar plağına 0.1 mL aktarın. L şeklinde bir cam çubuğu ateşleyin ve damlayı plakanın etrafına eşit şekilde yaymak için kullanın. Plakayı 48 saat boyunca kullanılan bakteri için uygun bir sıcaklıkta inkübe edin. Farklı bakteri tipleri farklı optimum büyüme sıcaklıklarına sahiptir. Referans materyali kullanarak optimum büyüme sıcaklığını bulamazsanız, plakaları 25 ve 37 derecede inkübe etmeyi deneyin.
Her seferinde sıvıyı farklı bir test tüpünden ilgili plakaya aktarırken 4. Adım'ı tekrarlayın.
Nüfus Hesaplamaları
Altı plakayı gözlemleyin ve 30 ila 200 izole kolonisi olanı seçin.
Kullanılan dilüsyon tüpünden kültürün mL başına hücre sayısını hesaplamak için plakadaki koloni sayısını 10 ile çarpın.
Orijinal kültürün mL başına hücre sayısını hesaplamak için Adım 2'den 10 ^ (plaka numarası) ile sayıyı çarpın. 10 ^ değeri (plaka numarası), bu plağı masumlaştırmak için kullanılan kültürün seyreltme faktörüdür.