İçerik
Bir çözeltide, protein gibi bazı bileşiklerin konsantrasyonunu belirlemek için bir spektrofotometre kullanılır. Genel olarak, bir ışık bir numune ile doldurulmuş bir küvetin içinden parlar. Numune tarafından emilen ışık miktarı ölçülür. Bileşikler farklı spektral aralıklarda ışığı emdiğinden, analiz için doğru dalga boyunun ayarlanması gerekir. Spektrofotometre ile bilinmeyen numunelerin konsantrasyonunu hesaplamanın çok sayıda yolu vardır, ancak referans standartlarını kullanmak en iyi doğruluğu verir. Ayrıca, standartlar ayrıca spektrofotometrenin arızalı mı yoksa analiz ile ilgili başka problemler mi olduğunu gösterir.
Düz Çizgi Denklemleriyle Hesaplama
Analizin başında referans standartlarını analiz edin. Standartlar bilinen konsantrasyonlardır ve ekipmanı kalibre etmek ve doğruluğunu kontrol etmek için kullanılır. Tüm numuneler standartların çalışma aralığında olmalıdır. Aksi takdirde, numunelerin seyreltilmesi veya standartların konsantrasyonunun arttırılması gerekecektir.
Standart konsantrasyon ve emicilik okumaları ile bir dağılım grafiği veya çizgi grafiği yapın. Konsantrasyon y ekseninde, x eksenindeki emilimde olacaktır. Örneğin, standartlar 1 ppm, 2,5 ppm ve 5 ppm'dir. Verilen emicilik 1 ppm = .25, 2.5 ppm = .5 ve 5 ppm = .75 idi.
Grafikte bir denklem görüntülemek için eğilim çizgisini biçimlendirin. Denklem, y = mx + b formülünü gösterecektir. Örneğin, 2. adımdaki standartları kullanarak denklem y = .1224x + 0.1531'dir. Çoğu trend çizgileri sıfırda yakalanır, ancak analitik yönteme ve R-kare değerine bağlıdır.
Bilinmeyen örnekleri analiz edin ve absorbans okumalarını kaydedin.
Örneklerin konsantrasyonunu belirlemek için denklemi (y = mx + b) kullanın.
Düz Çizgi Denklemini Anlamak
“Y” konsantrasyona eşit olsun. Bunun için çözülecek.
"X", numunenin emiciliğine eşit olsun. Spektrofotometre ile ölçülen emicilik budur.
“” Eğimi eşitlemesine ve “b” y-kesişimini eşitlemesine izin verin. Her ikisi de verilir, ancak trend çizgisi 0'dan zorlanırsa “b” 0 olur.
Konsantrasyon için çözün. 3. adımdaki örneği kullanarak, .563 verilen bir emilim olarak "x" yerine koyun. Bu nedenle:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (konsantrasyon) = 222211