Bilim adamları ve teknisyenlerin çoğu zaman bir süspansiyondaki hücre konsantrasyonunu hesaplamaları gerekir. Örneğin, bir hasta kanını doktorun ofisine götürdüğünde, laboratuvar belirli bir kan hacmindeki beyaz kan hücrelerinin miktarını aramak için belirli yöntemler kullanabilir. Bu, doktora hastası hakkında sağlık durumu, özellikle bağışıklık sistemi ve bir enfeksiyonla mı yoksa başka bir hastalıkla mı savaşıp savaşmadığı hakkında çok fazla bilgi verir. Bunun gibi testler kandaki birçok hücreyi, ayrıca spinal sıvıyı ve doğurganlık amacıyla sperm hücresi sayımı gibi diğer vücut sıvılarını arayabilir. Bilim adamları ayrıca ekolojik araştırmalardan endüstriyel teknolojilere kadar birçok amaç için bakteri, maya ve diğer mikroorganizmaların hücre konsantrasyonlarını hesaplarlar. En yaygın tekniklerden biri, birçok üniversite biyoloji dersinde de öğretilir ve bir sayma odası olarak adlandırılan bir cihaz kullanır.
Hücre süspansiyonu sayma odasına girmeden önce, binlerce veya milyonlarca hücre içerebileceği için dilüsyona ihtiyaç duyabilir. Bu durumda, hücreler makul bir şekilde sayılmaz. Numuneyi inceltmek için, 90 mikrolitre seyreltici içeren bir test tüpüne 10 mikrolitre hücre çözeltisi yerleştirmek için steril bir pipet kullanın. Seyreltici tipi hücre tipine bağlı olacaktır. İyice karıştırın. Bu çözelti şimdi ilk numuneden on kat daha fazla seyreltilmiştir, bu nedenle seyreltme faktörü 10'dur.-1. Etiketle. Solüsyon yeterince seyreltilinceye kadar her seferinde steril bir pipet kullanarak birkaç kez tekrarlayın. İkinci kez seyreltdiyseniz, ikinci test tüpü ilk çözeltiden 100 kat daha seyreltildi, bu nedenle seyreltme faktörü 10 idi.-2 ve bunun gibi.
Sayma odası için doğru dilüsyon faktörünü belirlemek için birkaç dilüsyon denemeniz gerekebilir. Bir sayma haznesi, temel olarak, kesin derinliği ve üst kısmına yerleştirilmiş hassas bir ızgaraya sahip, çok küçük, açık, dikdörtgen bir kutudur. Aynı zamanda hemasitometre veya bazen hemasitometre olarak da bilinir. Amaç, süspansiyonun, sayma odasına bakıldığında, hiçbir hücrenin üst üste gelmediği ve ızgara boyunca homojen bir şekilde dağılmış olmaları için yeterince seyreltilmesidir. Hücreleri içeren seyreltilmiş süspansiyonu, kılcal hareketle ızgara odasına yerleşeceği sayma odasındaki kuyuya pipetleyin. Sayma odasını mikroskop sahneye yerleştirin ve düşük güçle görüntüleyin.
Izgara, daha küçük karelerden yapılmış kareler içerir. Yaklaşık dört veya beş kare seçin, ancak dört köşe ve bir merkez kare gibi seçtiğiniz bir düzende en az 100 hücreyi saymanız gerekir. Hücreler büyükse, bunlar büyük kareler olabilir, ancak hücreler küçükse bunun yerine daha küçük kareleri seçebilirsiniz.
Her bir ızgara karesinin özgül hacmi, oda üreticisine göre değişebilir, ancak çoğu zaman, odanın derinliği 0.1 milimetredir, büyük karelerin alanı 1 milimetredir ve daha küçük karelerin alanı 0.04 milimetredir. Büyük kareler, o zaman, 0.1 küp milimetrelik bir hacme sahiptir. Bu örnekte, beş karede toplam 103 hücre saydığınızı ve ilk numuneyi dilüsyon faktörü 10 olana kadar seyreltdiğinizi varsayalım.-2.
Her bir ızgara karesinin bir hacmi 0.1 metreküp hacmine sahipse ve beşi sayıldıysa, sayılan odanın toplam hacmi 0.5 metreküp milimetre idi ve 103 hücre vardı. 1 metreküp yapmak için iki katına 206 hücre yapacaktı. Bir santimetreküp, 1 mililitere eşittir, bu sıvılar için yararlı bir ölçümdür. Santimetre küpte 1.000 metreküp vardır. Bu nedenle, santimetre küp veya mililitre süspansiyon olsaydı, 206.000 (206 x 1.000) hücre saymış olursunuz. Denklem olarak göründüğü gibi:
Izgara karesi hacmi × sayılan karelerin sayısı = toplam sayılan süspansiyonun hacmi
Hücre sayısı ÷ sayılan süspansiyonun hacmi = küp küp başına milimetre başına hücre sayısı
Küp başına mil sayısı × 1000 = mililitre başına hücre sayısı
İlk çözeltiyi mikroskopta sayılabilir hale getirmek için yapılan tüm dilüsyonları hesaba katmanız gerekecektir. Bu örnekte, dilüsyon faktörü 10-2. Solüsyonun ilk konsantrasyonunu hesaplamak için:
Mililitre başına hücre sayısı ÷ seyreltme faktörü = Hücre konsantrasyonu
Bu örnekte, mililitre başına düşen hücre sayısı 206.000'dir ve bunu 10'a bölmek-2 (0.01), ilk numunede mililitre başına 20.600.000 hücre hücre konsantrasyonu vermektedir.