İçerik
HPLC, bir numunedeki belirli kimyasal bileşenleri tanımlamak için hızlı, otomatik ve son derece hassas bir yöntem sunar, ancak pahalı, karmaşık olabilir ve tüm örnekler için işe yaramaz. Tıbbi, adli, çevre ve üretim laboratuvarları, bir numunedeki kimyasalları ölçmek ve ayırmak için bu tekniği kullanır. HPLC, diğer tekniklerle karşılaştırıldığında hem avantajlara hem de dezavantajlara sahiptir.
HPLC ve Benzeri Teknikler
Diğer kromatografi formları gibi, HPLC, bir mobil faz ve bir sabit faz kullanılarak kimyasal bileşenlerin ayrılmasına izin verir. Mobil faz sıvıdır ve sabit faz katıdır. Çünkü farklı bileşenler farklı hızlarda hareket ederler, birbirlerinden ayrılırlar. Alternatif teknikler, maddelerin bir elektrik alanındaki çözeltilerden geçtiği kılcal elektroforezi ve katı faz ekstraksiyonu, gaz kromatografisi ve ince tabaka kromatografisi gibi diğer kromatografik yöntemleri içerir.
Hız, Verimlilik ve Doğruluk
TLC gibi diğer kromatografik tekniklerle karşılaştırıldığında, HPLC oldukça hızlı ve verimlidir. Sıvı bir çözücüyü katı bir adsorban madde içinden zorlamak için yerçekimi yerine bir pompa kullanır, farklı kimyasal bileşenlerle farklı hızlarda hareket ederken ayrılır. İşlem yaklaşık 10 ila 30 dakika içinde tamamlanabilir ve yüksek çözünürlük sunar. Doğru ve yüksek derecede tekrarlanabilir. Büyük ölçüde otomatik olduğundan, temel HPLC çalışmaları minimum eğitim ile gerçekleştirilebilir.
Maliyet ve Karmaşıklık
Avantajlarına rağmen, HPLC pahalı olabilir ve büyük miktarlarda pahalı organik gerektirir. Katı faz ekstraksiyonu ve kılcal elektroforezi gibi teknikler, özellikle iyi üretim uygulamaları altındaki analizler için daha ucuz ve daha hızlı olabilir. Mevcut HPLC yöntemlerini kullanmak nispeten kolay olsa da, sorunları gidermek veya yeni yöntemler geliştirmek karmaşık olabilir. Bu büyük ölçüde farklı modüllerin, sütunların ve mobil fazların dizisinden kaynaklanmaktadır.
Duyarlılık ve Çözünürlük
Genel olarak, HPLC, kimyasal bileşenlerin belirlenmesi ve ölçülmesi konusunda çok yönlü ve son derece hassastır. Bir çok adım dahil olmak üzere, HPLC'nin kesinliği büyük ölçüde otomatik hale getirilmiş işlemden kaynaklanmaktadır ve bu nedenle yüksek oranda tekrarlanabilir. HPLC, belirli bileşikler için düşük hassasiyete sahiptir ve bazıları geri dönüşü olmayan bir şekilde adsorbe olduklarından tespit edilemez. Uçucu maddeler gaz kromatografisi ile daha iyi ayrılır.