İçerik
DNA
Deoksiribonükleik asit ve proteinler. DNA, her biri belirli bir RNA veya protein dizisini kodlayan gen adı verilen birimler halinde düzenlenmiştir. Biyolojik yapı ve fonksiyon, evrim, hastalık ve yaşam sistemlerinin diğer birçok yönünü öğrenmek için genler üzerinde çalışılmaktadır. Genleri ayrıntılı bir şekilde incelemek için, DNA'nın ilgili hücrelerden izole edilmesi ve saflaştırılması gerekir.
DNA Ekstraksiyonu
Tek bir hücreden DNA elde edilip çalışılabilmesine rağmen, çıplak gözle görmek yeterli değildir. Biriktirme için yeterli bir miktar elde etmek için, ne kadar çok hücre ile o kadar iyi çalışmalısınız (milyonlarca).
Kesin protokoller, spesifik numunelerin benzersiz özelliklerini hesaba katacak şekilde büyük ölçüde değişiklik gösterir, ancak genel adımlar homojenizasyon, lizis, sindirim, ayrılma ve toplamadır. Prosedür en iyi şekilde küçük (numune büyüklüğüne bağlı olarak) cam veya plastik bir tüp içinde gerçekleştirilir.
Bir numune, hücreleri birbirinden tamamen ayırmak için genellikle harmanlanır veya öğütülür. Bu, hücre bileşenlerini izleyen reaktifler için daha erişilebilir hale getirir. Deterjan veya enzimler daha sonra DNA'yı serbest bırakmak için hücre zarlarını (ve hücreler ökaryotik ise nükleer membranları) lize etmek için homojenata eklenir. Bu noktada, DNA proteinler, lipitler, karbonhidratlar ve hücrelerde bulunan diğer her şeyle çevrilidir.
Proteinleri parçalamak için DNA'ya bağlanmalarını ve toplanmalarını engellememelerini sağlamak için başka bir enzimatik sindirim gerekli olabilir. DNA, soğuk, saf, etil veya izopropil alkol ilave edilerek hücre içeriğinin geri kalanından ayrılır. DNA bu alkollerde çözünmez, bu nedenle alkolle temasını en aza indirmeye çalışmak yoğunlaşır. Yoğunlaştırılmış DNA daha sonra genellikle santrifüj --- veya biriktirme yoluyla toplanır.
DNA Biriktirme
Biriktirme yoluyla DNA toplama, bir ekstraksiyon işleminden büyük miktarda DNA elde edildiğinde etkilidir. Aynı zamanda mükemmel bir gösterim yöntemidir, çünkü saf DNA'nın etkileyici bir arapsaçı açıkça görülür.
DNA'yı biriktirmek için ayırma basamağı dikkatlice gerçekleştirilmelidir. Önceden eklenmiş lizis reaktif karışımının bir parçası değilse, alkol ekleme aşamasından önce çözeltiye konsantre bir tuz çözeltisi (sodyum klorür) eklenmelidir. Soğuk alkol, sulu çözeltinin tepesinde bir tabaka oluşturmak üzere karıştırmadan kaçınarak test tüpünün yanına yavaşça dökülür. Doğru yapılırsa, alkol tuzlu tabakanın üstünde kendi tabakasını oluşturur. Sonra biriktirme geliyor.
DNA'yı tuzlu tabakadan toplamak için, alkol tabakasını tüpün dibine değinceye kadar dikkatlice bir cam karıştırma çubuğu yerleştirin. İki tabaka arasındaki arayüzü izlerken çubuğu yavaşça parmakların arasında döndürün. Yeterli DNA varsa, sütlü bir yarı saydam kütle oluşturmak için katmanlar arasındaki arayüzde bir araya toplanacaktır. DNA'yı etrafına sarmak için çubuğu döndürün (biriktirme kısmıdır) ve tüpten çıkarın. DNA, depolama veya daha ileri analiz için başka bir saf alkol tüpüne aktarılabilir.