İçerik
Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), bileşikleri ayırmak ve tanımlamak için kullanılan bir laboratuar tekniğidir. Bir çözeltideki farklı bileşik kutuplarına dayanarak bunları ayırmak için kullanılan bir tip kolon kromatografisidir. HPLC, standart kolon kromatografisinden farklıdır çünkü çözeltiyi kolondan daha hızlı bir şekilde zorlamak için basınç kullanır ve bu nedenle daha hızlı ve bazen daha doğru sonuçlar verir. Amaç, kolondaki bileşikleri ayırmak ve ayrı ayrı çıkmalarını sağlamaktır.
elüsyona uğratılmasına
HPLC'nin hızı ve farklı bileşik kutuplarına dayanması nedeniyle, benzer yapı ve kutuplara sahip iki bileşik, aynı anda veya hemen hemen aynı anda kromatografi aparatından çıkabilmektedir. Bu coelution olarak bilinir. Coelution, karışımın tam olarak hangi bölümünün hangi noktada zorlaştığını belirlemeyi sağlar.
Adsorbe Edilen Bileşikler
HPLC tipik olarak, farklı malzemelerden yapılmış boncuklarla dolu bir cam sütun kullanır. Kolon içinden zorlanan karışımlar, boncuklara farklı kuvvetlerde bağlanan kimyasallara sahiptir. Polaritenin benzerliğine bağlı olan bağlamanın kuvveti, kimyasal maddenin serbest bırakılmadan önce boncuğa ne kadar süre bağlanacağını belirler. Bazı bileşikler o kadar güçlü bağlanırlar ki, esasen asla kolondaki boncuklardan salınmazlar ve asla kolondan çıkan çözeltide ölçülmezler.
Maliyet
Tipik laboratuvar ayırma teknikleri, bir tahlil veya ayırma metodu geliştirmeyi ve daha sonra bu tahlili ayrı ayrı bileşikleri bir solüsyondan ayırmak için uygulamayı içerir. Bununla birlikte, bu genellikle karmaşıklıkta üssel bir artışa yol açan prosedürlere tabi tutulması gereken birden fazla çözümle sonuçlanır. Her ne kadar HPLC bu işlemi basitleştirip hızlandırabilse de, bir HPLC aparatının geliştirilmesinin maliyeti çok büyük olabilir. Bir HPLC aparatının geliştirilmesi, çok daha verimli olmasına rağmen, bileşiklerin ayrılması için diğer analizlerin geliştirilmesinden çok daha maliyetlidir. Bu, birçok küçük özel laboratuvar için finansal olarak uygun değildir.
karmaşa
HPLC sadece basit bileşikleri ayırmak için kullanılmaz, ayrıca belirli proteinleri hücresel bir karışımdan izole etmek için de kullanılır. Bu durumda, kolondaki boncuklar genellikle toplamanız gereken proteine özgü bir antikorla kaplanır. Proteinler antikorları bağlar ve kalan çözelti kolondan geçirilir, sonra proteinler başka bir çözelti kullanılarak salınır ve toplanır. Bu, sütunu her zaman izlemek ve sürecin tam olarak planlandığı gibi çalıştığından emin olmak için çok yetenekli bir teknisyen gerektirir.