Uzun zaman önce, genetik mühendisliğinin bir bilim kurgusu, yani bir organizmayı diğerinin özellikleriyle büyütmesi gibi bir şey değildi. 1970'lerden bu yana, genetik manipülasyon teknikleri, yabancı DNA'nın bir organizmaya eklenmesinin neredeyse rutin olduğu noktaya ilerlemiştir. Örneğin, haşere direnci için genler mısır içine eklenebilir, insan insülini yapmak için genler bakterilere konabilir ve insan kanserlerini taklit etmek için genler laboratuvar farelerine konulabilir. Prosedürün detayları, her adımda birçok seçeneğe sahip olan kısa bir makalede tanımlanmayacak kadar karmaşıktır, ancak adımların mantıksal sırasının kavramsal taslağı oldukça basittir.
Bir kısıtlama enzimi ile plazmid DNA'yı ve ilgilenilen DNA'yı inkübe edin. Kısıtlama enzimi, spesifik bir DNA baz dizisi tespit edecek ve DNA'yı bu noktada parçalayacaktır. Kısıtlama enzimleri, bazı bakterilerin virüse karşı savunma mekanizmalarından elde edilir. Belirli bir baz düzenini tespit ettikleri yerde DNA'yı koparacak moleküllerdir.
Ayrılmış plazmid ve genomik DNA fragmanlarını DNA ligaz ile inkübe edin. Çoğu kısıtlama enziminde, dairesel plazmid ve genomik DNA fragmanları, birbirine tutunacak tamamlayıcı "yapışkan uçlara" sahip olacaktır. DNA ligazı daha sonra parçaları birbirine yapıştırmayı bitirir. Sonuç, genomik DNA'nın bölümlerini içeren bir grup dairesel plazmittir.
Plazmitleri bakteri içine yerleştirin ve değiştirilmiş DNA ile emprenye edilmiş organizma kolonileri oluşturmak için bakterileri kültürleyin. Plazmidinizde konakçı bakterilerin bulunmadığı bir antibiyotiğe dirençli gen varsa, bakterileri antibiyotik ile beslenmiş büyüme ortamı üzerinde kültürleyerek başarıyla değiştirilmiş bakterileri tarayabilirsiniz. Plazmidleri bakterilere yerleştirmek için, örneğin bir mikro iğne kullanmak, bakteriler zarında küçük delikler açmak için bir elektrik alanı uygulamak veya sadece bakteri ve plazmidleri aynı çözeltide bir araya getirmek ve bakterilerin bunları emmesini sağlamak gibi çeşitli yöntemler vardır. doğal olarak.
Modifiye edilmiş bakterilerin farklı kolonilerinden örnek hücreler. Bakteriyel membranları parçalamak ve DNA'yı çıkarmak için örneklenen hücreleri bir deterjan çözeltisiyle yıkayın, daha sonra ısıtın veya telleri ayırmak için sodyum hidroksit'e maruz bırakın. Bu, DNA'nın baz dizisini analize tabi tutar.
DNA'yı floresan probu ile inkübe edin. İnkübasyon edilen DNA'ya ultraviyole ışık tutun ve floresans gözlemleyin. Prob, yerleştirdiğiniz genomik DNA ile eşleşen kısa bir DNA dizisinden oluşur. Prob, aradığınız DNA ile eşleştiğinde, aydınlatıldığında parlar.
Bakteri eklemek istediğiniz gen içeren kolonilerden izole edin. Bakteriyel kolonilerin çoğalmasına izin vererek DNA'nızı çoğaltın veya daha önce yaptığınız gibi DNA'yı çıkarın ve bir polimeraz zincir reaksiyonu makinesinde çoğaltın.