İçerik
Mikrobiyologlar, mikroskop kullanarak alg, protozoa, bakteri, mantar ve virüs gibi mikroorganizmaların özelliklerini araştırır. Protozoa ve maya hücreleri gibi bazı organizmaların ıslak bir montaj kullanarak gözlemlenmesi kolay olmakla birlikte, bakteriyel hücrelerin boyanması gerekir. Bilim adamları, bakteri hücrelerinin ve hücresel yapıların daha iyi görüntülenmesi için Gram boyama, aside dayanıklı boyama ve flüoresan boyama gibi çeşitli yöntemler geliştirdi. Bu tür boyama yöntemlerini kullanarak, bakterileri sınıflandırmaya yardımcı olan yapısal özellikleri tanımlamak mümkündür.
Daha iyi görselleştirme
Bakteriyel organizmalar o kadar küçüktür ki, çoğu yalnızca 1000X büyütme gücüne sahip bir mikroskop altında görülebilir. Bununla birlikte, sadece büyüklükte bir büyütme yeterli derecede netlik sağlamaz, bu nedenle görselleştirme için gereken netliği sağlamak için bakterilerin gözlemden önce boyanması gerekir.
Tanımlama ve Sınıflandırma
Bakteri türlerini ayırt etmek için bakterilerin boyanması diferansiyel boyama olarak bilinir. Gram boyası, hücre duvarı içeriği temelinde bakteri arasında ayrım yapan bir tür farklı boyadır. Bu yöntemde, bakteriyel hücreler, menekşe rengini almak için kristal menekşe lekesi ile reaksiyona girer. Leke çıkarma maddesi eklendiğinde, bazı bakteriyel hücreler renk kaybederken, diğerleri yok. Safranin lekesi eklendiğinde, renk kaybeden hücrelerin rengi görünmezken, renk kaybetmeyen bakteriyel hücreler menekşe kalır. Kırmızı rengi alan bakteriyel hücrelere Gram negatif organizmalar, rengi almayanlara Gram pozitif organizmalar denir. Gram boyama, enfeksiyonlara katılan bakterilerin ilk tanımlanması için hızlı bir yöntem sağlar. Benzer şekilde, asit-hızlı boyama prosedürü, Mycobacterium tuberculosis gibi Mycobacteria adı verilen bakteri sınıfına ait organizmaları spesifik olarak tanımlamaya yardımcı olur.
Canlılık Tespiti
Bakteriyel kültür örneklerinde, yaşayan bakteri hücrelerinin varlığını tespit etmek çoğu zaman önemlidir. Floresan boyama gibi boyama yöntemleri, kültür hücrelerinin yaşayabilir olup olmadığını tespit etmeye yardımcı olur. Canlı bakteriler, 5-Siyano-2,3-ditolil Tetrazolyum Klorür (CTC) lekesini kırmızı bir flüoresans gösteren bir boyaya dönüştürme kabiliyetine sahiptir. Bu nedenle, CTC ile boyanmış kültürler bu tür bir flüoresans yayarsa, canlı bakterilerin varlığını gösterir. Propidium iyodür, yalnızca zarar görmüş zarlara sahip olan canlı olmayan hücrelere etki eden bir lekedir ve bu nedenle ölü bakteri hücrelerinin tanımlanmasında faydalıdır.
Hücresel Yapıları Tanımlama
Boyama, birkaç hücresel yapının net bir şekilde görselleştirilmesi için bir yöntem sağlar. Örneğin, Fuelgen boyama yöntemi, bakteri hücreleri içindeki çekirdeğin tanımlanmasına izin verirken, Albert'in boyaması, metakromatik granüllerin görselleştirilmesinde faydalıdır. Benzer şekilde, gümüş emprenye tekniği, spiroketlerin tanımlanmasına izin verir. Flagella, Ryu’nun lekesiyle lekelendiğinde gözlemlenmesi kolaydır. Malakit yeşili lekelenmesi bakteriyel sporları tanımlamaya yardımcı olur.