İçerik
- Jel Elektroforezi Nasıl Çalışır?
- Temel Bir Elektroforez Prosedürü
- Bilinmeyen Parçaların Uzunluklarının Belirlenmesi
Hücrelerden çok daha küçük olan DNA fragmanlarının uzunluğunun ölçülmesi söz konusu olduğunda, mikrobiyologların bir numaraya ihtiyacı vardır ve en uygun olanı jel elektroforezidir. Bu yöntem, DNA fragmanlarının yüklenmesine dayanır ve DNA'nın çift sarmal yapısının keşfedilmesinden sorumlu olan X-ışını kristalografisi gibi daha pahalı yöntemlere bir alternatiftir.
Jel Elektroforezi Nasıl Çalışır?
DNA molekülleri yüklendiği için elektrik akımından etkilenirler. Onları nötr bir jele yerleştirip jelin üzerine bir akım koyduğunuzda, moleküller pozitif elektroda (anot) doğru göç eder. Farklı boyutlardaki DNA molekülleri aynı yükü taşıdığı için, daha küçük olanlar daha hızlı hareket eder, bu nedenle bu işlem molekülleri bilinen boyutlardaki örneklerle karşılaştırılabilecek bantlara ayırır.
Temel Bir Elektroforez Prosedürü
Jel genellikle bir tampon çözeltide ısıtıldığında yarı katı, hafif gözenekli bir jel oluşturan bir polisakarit olan agarozdan yapılır. Bir uçta, jel, araştırmacının DNA örneklerini inceleme altına aldığı, kuyu adı verilen ve örnek olarak bir DNA merdiveni adı verilen referans örnekleriyle yerleştirdiği kuyu denilen küçük girintiler oluşturur. Merdiven parçalarının uzunlukları, X-ışını kristalografisi gibi başka bir yöntemle önceden belirlenmiştir.
Jel iletken bir çözelti içine daldırıldığında ve voltaj uygulandığında, parçalar jel içinden geçmeye başlar - ilk önce küçük olanlar ve daha büyük, daha yavaş olanlar geride. Sonunda kendilerini boyuta göre spektrum benzeri bantlar halinde oluştururlar.
Bu gerçekleştiğinde, araştırmacı gücü keser, jeli bir DVA bağlayıcı boya ile doldurur ve örnekleri ultraviyole ışığı altında inceler. Merdiveni referans olarak kullanarak, araştırmacı, her bir parçanın boyutunu gözle görülür bir bantta belirleyebilir. Sadece bantlar görülebilir - DNA parçalarını görmek için çok küçük.
Bilinmeyen Parçaların Uzunluklarının Belirlenmesi
Bir örneklemdeki her grup merdivenin üzerindeki bir bantla eşleşmiyor, bu yüzden bu bilinmeyen parçaların boyutlarını belirlemek için bilim adamları genellikle bir grafik çiziyorlar. X ekseni üzerinde, merdivendeki her bandın milimetre cinsinden kat ettiği mesafe, y ekseni üzerinde ise her bandın boyutu. Noktalar bir eğri ile birleştirildiğinde, o bandın kat ettiği mesafe milimetre cinsinden ölçüldükten sonra herhangi bir bandın ebadı eğriden hesaplanabilir.