İçerik
Escherichia coli, E. coli, memelilerin alt bağırsaklarında yetişen bir bakteridir. Bu bakteri ilk olarak 1800’lerin sonlarında keşfedildi. O zamandan beri, bilimsel araştırmalarda uzun bir kullanım geçmişine sahiptir. Moleküler genetikte en yaygın kullanılan organizmadır. E. coli'nin bilimsel araştırmalarda yaygın olarak kullanılmasının bir nedeni, laboratuvarda yetiştirilmesinin kolay olmasıdır. E. coli'nin büyümesini kolaylaştıran faktörler, basit beslenme ihtiyaçları, hızlı büyüme hızı ve ılımlı bakım gereksinimleridir.
Bunsen brülörünün alevi içine yerleştirerek aşılama döngüsünü sterilize edin. Döngünün alt yarısını alevden kırmızı renkte yanıncaya kadar geçirin.
Döngünün soğumasını bekleyin. Soğuduğundan emin olmak için plakadaki steril agara dokunabilirsiniz. Döngüyü masaya yerleştirmeyin ya da steril hale getirilmiş olan steril agar veya istenen kültürden başka bir şeye temas etmesine izin vermeyin.
Döngüyü E. coli kültürüne batırın ve sonra çıkarın.
Agar plakasını açın ve halkayı, agarın bir bölümünün yüzeyi boyunca ileri geri kaydırın. Döngü ile agarı çizmemeye dikkat edin. Agar, E. coli'nin büyümesi gereken besin maddelerini sağlar.
Döngüyü, sterilize etmek için Bunsen yakıcı alevine tekrar yerleştirin. Döngü çubuğu soğuduğunda, soğuduğundan emin olmak için plakanın steril bir kısmına dokunun, ardından ikinci bir çizgi oluşturmak için döngüyü ilk şeridin üzerinden kaydırın. Bu ikinci çizgi, birinci çizginin seyreltilmiş bir versiyonudur. Agar plakanın birkaç kısmı kayana kadar bu sterilizasyon ve kayma işlemini tekrarlayın. Bunu yapmanın nedeni, daha sonra tek, klonal kolonilerden seçebilmenizdir. Bu, tek tek kolonilere sahip en az bir bölümünüzün olduğundan emin olmanıza yardımcı olacaktır - çok konsantre değil (bu çok fazla büyüme gösterecek ve tek bir koloniden seçim yapmanıza izin vermeyecektir) ve fazla seyreltilmemiş (koloni vermeyecek) .
Çalışma alanına bir kenara koymadan önce, alevi ilmekle son defa sterilize edin.
Üst kısmı tekrar agar plakasına yerleştirin. Plakayı baş aşağı çevirin ve 37 santigrat derece (98.6 derece Fahrenheit) ayarlı inkübatöre yerleştirin. Bu ideal inkübasyon sıcaklığı, E. coli'nin bulunduğu insan vücudunun sıcaklığını simüle eder. 24 ila 48 saat içinde agar plakasında görünür E. coli bakteri kolonileri ortaya çıkacaktır.