İçerik
Bir virüs için titrenin hesaplanması, bir bilim adamının belirli bir örnekteki virüs sayısını saydığını söylemenin karmaşık bir yoludur. Virüs titrelerini hesaplamak için, bilim adamları değişen konsantrasyonlarda viral çözeltilerle büyüyen bakteri plakalarını enfekte eder ve viral enfeksiyon nedeniyle ölen bakterileri sayarak orijinal çözeltideki virüslerin sayısını çözerler.
Seri Dilüsyonlar
Eldivenleri takın, 10 kültür tüpünü 9 ml et suyu ile doldurun ve bunları “10 ^ -1”, “10 ^ -2”, “10 ^ -3” vb. “10 ^ -10” değerine kadar etiketleyin. Faj titresi hesaplamak için kullanılan viral seri dilüsyonları için kullanılacaktır. Virüsler inanılmaz derecede yüksek konsantrasyonlarda büyüyebildiğinden, etkili bir şekilde saymak için onları seyreltmeniz gerekir. Her tüp, virüsün on kat seyreltilmesini temsil eder.
Bir faj titresi hesaplamak istediğiniz virüs kültüründen 1 ml alın ve bir pipet ile “10 ^ -1” adlı tüpe aktarın. Tüpü iyice karıştırın. Bu senin ilk on kat dilüsyonun.
“10 ^ -1” etiketli tüpünüzden karışık kültürün 1 ml'sini alın ve yeni bir pipetle “10 ^ -2” etiketli bir sonraki tüpe aktarın. Bu tüpü de karıştırın.
Seri seyreltme serisi oluşturmak için bu desene devam edin. 9 tüp 9 ml ve 1 tüp 10 ml ile biteceksiniz. Tüplerinizdeki viral yükler, 10 kez (ilk tüpünüz) veya 100 kez (ikinci tüpünüz) ila 10 milyar kez (son tüpünüz) herhangi bir yerde seyreltilecektir.
Titreyi Hesaplamak için Plaka Hazırlama
10 tüp tripton yumuşak agar ve 10 Petri plakası alın ve bunları seri seyreltme tüplerinizle eşleşecek şekilde etiketleyin.
Kapakları gevşetin, böylece ısıya çarpmazlar ve daha sonra agar tüplerinizi kaynar su kabına yerleştirin. Bu, agarı eritir, böylece onu Petri plakalarına dökebilirsiniz.
Tüplerinizi en az 45 santigrat derece sıcak su banyosuna alın. Bu, bir Petri kabına dökmek için bir şansınız olmadan agarınızın tüplerde katılaşmamasını sağlayacaktır.
Agarınıza iki damla bakteri kültürü ekleyin ve yavaşça karıştırın. Bunlar öldürülecek bakteridir ve belirli bir çözeltideki virüs partiküllerinin sayısını saymanıza izin verir.
Tüpler hala sıcak su banyosundayken, karşılık gelen agar tüpüne her seri seyreltmeden 1 ml ekleyin. Örneğin, 10 ^ -1 seri seyreltmenizin 1 ml'si “10 ^ -1” etiketli agar tüpüne girmelidir.
Her bir tüpü karıştırın ve ardından her tüpü ilgili etiketle Petri plakasına dökün. Bu, her plakadaki bakteri ve virüslerle aşılanmış ince bir ağar tabakası oluşturacaktır. Plakalar bir inkübatörde gece boyunca büyümesine izin verin.
Virüs Titerini Sayma ve Hesaplama
Plakalarını kuluçka makinesinden çıkarın ve inceleyin. Plak adı verilen küçük açık noktalar dışında, bakterilerin büyüdüğü plaka boyunca bulutlu alanlar görmelisiniz. Bu plaklar ölü bakteri lekeleridir ve her plak bir virüsü temsil eder.
30 ile 300 arasında plağı olan bir plaka bulun ve bu plakadaki tam plaka sayısını sayın.
Tabağınızdaki plakaların sayısını alın ve 10 ile çarpın. 157 plak sayarsanız, 1570 elde edersiniz.
Önceki adımda elde ettiğiniz sayıyı, seyreltme tüpünüzdeki sayının tersi ile çarpın. Örneğin, seçtiğiniz plaka 10 ^ -5 plak ise, 157000000 elde etmek için 1570 ile 10 ^ 5'i çarpmanız gerekir. Bu son sayı faj titrenizdir ve orijinal kültürünüzün ml başına düşen virüs sayısını gösterir.