İçerik
Yüksek performanslı sıvı kromatografisi, bir karışımın laboratuvar analizi için bir tekniktir. Bir karışımdan bir karışım numunesini bir kolondan itmek için basitçe yerçekimi yerine yüksek basınç kullanan etkili bir kromatografi türüdür. Bir numune enjekte edilir, daha sonra yüksek miktarda basınç içeren bir pompa, numuneyi ayrı bileşenlere ayrıldığı dolu bir kolon boyunca hareket ettirmeye yardımcı olur. Bu ayırma daha sonra sonuçları elde etmek için bir dedektör tarafından analiz edilir.
Enjeksiyon sitesi
Bir HPLC'ye enjekte edilmek için, bir numunenin önce polar bir sıvı çözücü içinde, tercihen bilinen HPLC spektrumuna sahip bir tane içinde çözülmesi gerekir; böylece verileri numunelerden ayırt edilebilir. Numuneyi içeren sıvı çözelti cihaza yerleştirilir ve kolona gönderilir. Enjeksiyon yerinin asıl konumu, aletlerin markasına bağlıdır. Çoğu durumda, enjeksiyon işlemi otomatiktir, ancak bazı durumlarda bir laboratuvar çalışanı küçük bir şırınga iğnesi kullanarak numuneyi enjekte etmelidir.
Pompa Bileşeni
HPLC ünitesinin pompa bileşeni gereklidir, çünkü numuneyi kolon boyunca iten basıncı sağlar. Pompa kuvveti değişir, ancak güçlü olanı, numune enjekte edildikten sonra uygulanan 6.000 psi'ye kadar bir basınç ya da inç kare başına pound üretebilir. Bu, numunenin sadece yerçekimi kuvveti kullanarak damlayacağından daha hızlı ve verimli bir şekilde kolondan geçmesine izin verir.
Kolon AÇIKLAMASI
Bir pompa ile kolondan geçen bir numunenin artan hızı, basit sıvı kromatografisinde kullanılanlardan farklı bir tip kolon kullanılmasına izin verir. Kolondaki paketleme malzemesi daha küçük bir parçacık boyutuna sahip olabilir, bu da yüzey alanını arttırır ve bu nedenle numunenin kolon ile etkileşimlerine yardımcı olur. Çoğu HPLC sütunu polariteyle çalışır. Numune bir polar çözücü içinde çözülür ve kolon, büyük ölçüde polar olmayan hidrokarbonlardan oluşur. Numune molekülünün polar kısımları çok hızlı bir şekilde kolondan geçer, çünkü bunlar esasen çözücü ile etkileşime girerler, oysa polar olmayan bileşenler kolonun içinde uzanır ve kolon bileşenleri ile zayıf etkileşimler oluşturur. Bu nedenle, numune bileşenleri çoğu kutuptan kutupsuz'a doğru sırayla kolondan çıkar.
Dedektör İşlevi
Dedektörler ayrıca, kullanılan HPLC enstrümanının tipine göre değişir. Ancak, çoğu aynı şekilde çalışır. Bir ultraviyole ışık kaynağı, kolondan çıktıkça ayrılan numune bileşenleri üzerinde parlar. Çoğu organik bileşik belirli bir miktarda ışığı emer, böylece uygulanan ışık demeti tarafından geçtiklerinde, bir detektör ne kadar ışığın emildiğini toplayabilir. Dedektör ayrıca, kolondan çıktıkları sıraya göre bileşenlerin tutma süresini kaydeder. Bu çıktı daha sonra numune bileşenlerinin tam yapısını belirlemek için tepe alanına göre analiz edilebilir.