İçerik
Sıvı besin suyu, Escherichia coli gibi bakterileri kültürlemek için kullanılır. Bu çorba için tarifler, bakteri türlerine ve genetik modifikasyonların, örneğin antibiyotik direncinin varlığına bağlı olarak değişir. Et suyu, bakterilerin farklı koloniler oluşturmasını sağlayan agar eklenerek katılaştırılabilir, oysa sıvı kültürde hacim boyunca kolayca dağılırlar. Bu, gen klonlama veya mikrobiyolojik analizler gibi ileri yöntemler için temel fakat gerekli bir tekniktir. Bu makale standart laboratuar Escherichia coli suşlarının Luria besiyeri (LB) agar plakalarında (veya petri kaplarında) kültürleneceğini varsaymaktadır.
10 gram bakteri sınıfı tripton, 5 gram maya özütü, 5 gram sodyum klorür, 15 gram agar veya agaroz ve 1 mililitre İN sodyum hidroksit tartılır. Bunları 1 litre ortam elde edene kadar distile ve otoklavlanmış steril su ile karıştırın. Medyayı gevşek kapaklı şişelerde veya şişelerde 25 dakika boyunca otoklavlayın. Antibiyotik veya diğer besin takviyeleri gibi yüksek ısıda yok edilecek reaktifleri eklemeden önce yaklaşık 50 santigrat dereceye kadar soğumaya bırakın.
Agar dökülmeden önce kabına koyacağından, otoklavlanmış ortamın 50 dereceye kadar soğumasına ve 45 derecenin altına düşmesine izin vermeyin. Steril petri kapları alın ve plakanın tüm yüzey alanını ve derinliğinin en az yarısını kaplayacak kadar dökün. Plakaları fazla doldurmaktan kaçının ve tercihen agarın yemeğin üst kenarı ile temas etmesine izin vermeyin. Plakaları, steril bir ortamda (örneğin bir laminer akış kaputu altında) kapakları kapalı ve kaputun bir köşesine bırakarak katılaşmasını sağlayın.
Plakaları kurutun. Plakalar yerleştirildikten hemen sonra kullanılabilseler de, agarın yüzeyinde bakteriyel kolonilerin yeterince yapışmasını önleyen bir miktar nem mevcut olacaktır. Bu nedenle, herhangi bir bakteri uygulamadan önce plakaları kurutmak en iyisidir, örneğin laminer akış başlığı altında veya 37 santigrat derece bir inkübatörde birkaç gün veya yarım saat boyunca oda sıcaklığında bırakarak.
Plakaları saklayın. Kurutulmuş plakalar kapaklarının üzerinde baş aşağı istiflenmeli (ters çevrilmeli) ve orijinal ambalajlarına geri gönderilmeli, bantla kapatılmalı ve ışıktan veya uygun bir kap içinde folyoya sarılmalıdır. Her zaman hazırlık tarihini plakalara yazın ve plakalar 2 aydan daha eskiyse kullanmaktan kaçının.