İçerik
Bakteriler Petri tabaklarında, yükseltilmiş dairesel koloniler oluşturan bakteriyel agar olarak bilinen katı bir ortam üzerinde büyütülür. Bireysel bakteri hücresinden farklı olarak, bir koloni çıplak gözle görülebilen büyüklükte bir bakteri grubudur. Bakteriyel büyüme, kaç koloninin mevcut olduğuna dair basit bir gözlem ile ölçülebilir; Bununla birlikte, daha kantitatif yöntemler arasında bir sayma odasının kullanımı veya daha sık olarak uygulanabilir plaka sayıları bulunur. Sonuncusu, sıklıkla, farklı büyüme koşullarının etkisi gibi nitel bilgiler sağladığı için kullanılır. Bir petri kabında milyarlarca bakteri olabileceğinden, önce ölçüm yapmak, örneğin koloni sayısını saymak için numunenin seyreltilmesini gerektirir.
Bir test tüpünde, 90 mikrolitre seyreltme ortamına 10 mikrolitre başlangıç bakteri kültürü ilave edin. Tüpün kapağını sıkıca kapatın ve homojen bir karışım elde etmek için yavaşça vorteksleyin. Şimdi örnek orijinal konsantrasyonunun onda biri.
Bu yeni numunenin 10 mikrolitresini, 90 mikrolitre seyreltme ortamı içeren yeni bir test tüpüne aktarın, tekrar karıştırın. Bir kez daha, sonuç daha fazla seyreltilmiş numune olacaktır - şimdi orijinal konsantrasyonunun yüzdesi olacaktır. Orijinal örnek 10 arasında seyreltilene kadar bunu birkaç kez tekrarlayın.4 ve 1010 zamanlar. Her tüpün doğru dilüsyon ile etiketlendiğinden emin olun, örneğin 10-1, 10-2 ve bunun gibi.
Agar plakasına tamamlanan son seyreltmeden 10 mikrolitre dağıtın. Serpme kenarını kullanarak, bakteri çözeltisini agar plakanın tüm yüzeyi boyunca dağıtın. İki plaka için bunu tekrarlayın. Karşılaştırma için bu aşamaları diğer seyreltme seviyelerinde gerçekleştirmek de yaygındır. Plakaların diplerini etiketlediğinizden emin olun. Her bir plakanın üzerindeki kapakları değiştirin ve agar plakalarının bir alevin altındaki bir laboratuvar bankında veya bir inkübatörde birkaç dakika kurumasını bekleyin. Plakaları bakteri suşu için uygun sıcaklığa ayarlanması gereken inkübatöre yerleştirin. 12 ila 16 saat büyümeye bırakın.
Koloniler 16 saat sonra görünür olmalı; Bununla birlikte, bazı genetik değişiklikler daha uzun sürebilir (örneğin, renk gelişimi). Koloniler gözlemlendiğinde, plakaları çıkarın ve 30 ila 300 kolonisi olanları bulun. Kalıcı bir işaretleyici kullanarak, petri kabının tabanına - ağar ile birlikte, kapağı değil - bir agar boyunca bir koloninin görülebildiği yere - bir nokta yerleştirin. Her işaretleyici noktasını sayın. Her yemek için tekrarlayın.
Bu deney için başlangıç kültüründeki bakteri miktarını ölçmek için, seyreltme hesaplamalarında iki yerde tersine çevrilmelidir. Öncelikle, petri kabına koymak için test tüpünden bir mikrolitre aldığınızda, seyreltilmiş numunenin onda birini aldınız, bu yüzden her şeyi 10 ile çarpmanız gerekiyor. Ek olarak, test tüpündeki dilüsyon faktörü örneğin 10 ise,-7 o zaman kolonilerin sayısı 10 ile çarpılmalıdır.7 seyreltme etkisini tersine çevirmek için. Hesaplamalardaki üsse eksi işaretini kaldırmanız yeterlidir. Formülü kullanın:
× 10 × = Başlangıç kültürü mililitresi başına koloni oluşturan birim sayısı (CFU). Bu, petri kabılarınızdaki bakteri üremesidir.