İçerik
- Avantajı: hassasiyet
- Avantajı: özgüllüğü
- Dezavantaj: Yanlış veya Öznel Sonuçlara Yönelik
- Dezavantaj: Yüksek Maliyet ve Teknik Talep
Belirli bir numunedeki belirli bir proteini kesin olarak belirlemek için kullanılan analitik bir teknik olan Western blot, bir enzim veya flüoresans etiketli primer antikorun spesifik antijenine bağlanma özelliğini kullanır. Jel elektroforezi ile başlayan, ardından membran lekeleme ve antikorlarla problama ile üç aşamalı bir işlemdir. Protein tespiti doğrudan veya dolaylı olabilir, ikincisi prime karşı etiketlenmiş sekonder bir antikor kullanılır. Rutin bir protein analiz tekniği olarak kabul edilmesine rağmen, western blot'un faydaları kadar sınırlamaları da vardır.
Avantajı: hassasiyet
Western blot lehine en büyük argümanlardan biri hassasiyetidir. Bir numunede 0.1 nanogram kadar proteini tespit etme kabiliyetinden dolayı, teknik, teorik olarak hasta bir numunedeki bir virüs veya bakteriden gelen en hafif immünojenik cevabı bile algılayan etkili bir erken teşhis aracı olarak işlev görebilir. Dolaylı bir western blot, bu duyarlılıktan ikincil antikorun, görüntüleme sistemi tarafından tespit edilen sinyalin yoğunluğunu arttırma kabiliyetinden de oluşur. Daha fazla hassasiyet, laboratuvar maliyetlerini önemli ölçüde azaltan test için daha az sayıda antikorun gerekli olduğu anlamına gelir.
Avantajı: özgüllüğü
Western blot tekniği özgüllüğünü iki büyük katkıda bulunan faktöre borçludur. İlk olarak, jel elektroforezi farklı büyüklük, yük ve konformasyona sahip proteinlere bir örnek verir. Bu işlem kendi içinde, jelde oluşturulan bantlar, ilgilenilen protein veya polipeptidin büyüklüğü hakkında ipucu verdiği için saptama yönünde büyük bir adımdır. Antikor-antijen etkileşiminin özgüllüğü ikinci büyük faktör olarak işlev görür. Spesifik antikorlar, spesifik proteinler için afinite gösterdiğinden, işlem, 300.000 farklı protein karışımında bile seçici bir proteini seçici olarak saptayabilir.
Dezavantaj: Yanlış veya Öznel Sonuçlara Yönelik
Hassasiyetine ve özgüllüğüne rağmen, bir western blot hala hatalı sonuçlar üretebilir. Bir antikor, amaçlanmayan bir proteinle reaksiyona girdiğinde yanlış-pozitif bir sonuç verir; bu, HIV için test edilen bir hastanın tüberkülozu veya bir miktar parazitik enfeksiyona sahip olması durumunda sıklıkla gerçekleşir. Diğer taraftan, yanlış-negatif, daha büyük proteinlere zara düzgün bir şekilde transfer etmek için yeterli zaman verilmezse kolayca sonuçlanabilir. Yanlış lekeleme ve işlem sıklıkla teknisyenin yorumlanmasına tabi tutulan test sonuçlarını yaparak eğri, soluk ve hatta birden fazla bant üretir.
Dezavantaj: Yüksek Maliyet ve Teknik Talep
Western blotun maliyeti, etiketli antikorlar, uzman analistler ve laboratuar ekipmanları için yapılan bireysel harcamaların bir birleşimidir. Hassas bir işlem olan western blot, bir numunenin bileşenlerinin doğru tanımlanması için her adımda hassasiyet gerektirir. Reaktif konsantrasyonunda veya inkübasyon süresinde küçük bir hata, tüm işlem için feci olabilir. Son olarak, algılama ve görüntüleme için gerekli ekipman - kimyasal ışıldayan, floresan, radyoaktif veya lazerli algılama sistemleri - ortalama mikrobiyoloji ünitesi için çok pahalı olabilir.